菌种脱毒技术

随着组织培养技术的研究和发展，脱毒马铃薯和脱毒花卉已用于生产。这些脱毒苗明显表现出高抗高产等预期生产特性，深受农民欢迎。近年来，食用菌病害频发，生产上尚无特效防治药物。将植物脱毒技术应用到食用菌生产中，可以有效抑制病害的发生。所谓植物脱毒，就是将植物茎尖的生长尖组织分离出来，将分离出的组织置于特定的培养基中进行培养，从而获得不含原有病毒和病原体的新苗。具体到食用菌的解毒增殖，严格来说，一般的组织分离不能达到解毒的目的。解毒效果不明显。对食用菌顶端生长点的解毒效果理想。具体的脱毒方法有两种： 1、菌丝尖端脱毒技术以使用90mm或110mm规格的培养皿为宜。没有该规格的培养皿时，也可用规格为25mm200mm的大试管代替，但操作不太方便。先按常规准备母种培养基，放入锥形瓶中，用棉塞密封，用羊皮纸包好；同时，清洗培养皿并用羊皮纸包好。两者同时消毒。在121C 下灭菌30 分钟。当灭菌器内压力为零时，取出灭菌后的物料，放入预先灭菌好的接种箱中。打开牛皮纸包装，一手拿着培养皿，一手拿着三角瓶，用手指控制打开培养皿上盖约1-2厘米，倒入约10-20毫升培养基液体，盖紧。将培养皿平放，冷却后成为光滑的平面，俗称平板。当板冷却到30C 以下时，插入待解毒的菌株。接种方法：取一粒米粒大小的种源插入盘边。接种后，在规定温度下培养（根据品种调节温度）。当菌丝萌发到最大2cm时，用锋利的接种工具将菌丝体顶端剪去约1mm，插到新的平板上。这是1排毒。一般连续34次即可解毒。排毒次数越多，排毒效果越有保证。 2、原始组织解毒技术该技术最大程度消除了子实体在生长中后期原始组织分离时携带病毒和细菌的可能性极高的弊端，真正实现了解毒分离尖端组织的目的。具体操作如下：常规配制基材，氮气比调整为30：1。碳氮比不宜低于25：1，以免菌丝过强形成菌皮，原基不易出现。把大口罐洗干净放在一边。准备几块11 厘米x 11 厘米的纯棉纱布。灌装至瓶口以下1厘米时，从瓶口铺上一层纱布，用一字螺丝刀将纱布的边缘插入瓶口下方，使其紧贴瓶口。封口灭菌、接种、培养等操作照常进行。菌丝装满瓶后，施加温差、湿度差、光照等刺激，一般7天左右即可出现原基。此时原基的形状是白色的块状物。当原基高达1厘米时，即可进行解毒分离。菌瓶用75%酒精擦洗后，移入灭菌后的接种箱内，箱内不再常规熏蒸。同时准备好接种针（或接种钩）、多片刀片（交替使用），与菌瓶一起放入接种箱内，喷洒溴洁尔胺，确保无菌操作。用75%的酒精擦洗双手，伸入接种盒内，将刀片烧灼消毒，然后握住冷却。打开无菌小瓶的密封，用双手用无菌镊子取出原基。由于材料表面覆盖了一层纱布，不会将基材取出，操作方便。用刀片将原基表层切掉约1mm，再用锋利的刀片将原基切割成每块约1mm2的大小。使用接种针将分离的原基片转移到平板或大试管中进行常规培养。操作要点：一、用刀片裁剪时，每剪一刀都要更换刀片；第二，分离块连接时一定要放在边缘，可以连接在平板的边缘或者试管的前面，一般不要放在中间。